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【摘要】 本發(fā)明涉及一種利用乳酸桿菌和酵母菌生產(chǎn)微生物多糖制劑的制備方法，其特征在于，采用有益菌株的液體培養(yǎng)；離心收集菌體細胞壁；然后將菌群進行固體擴大培養(yǎng)，在培養(yǎng)物中添加收集富含多糖的細胞壁。本發(fā)明的優(yōu)點是產(chǎn)品中的高濃度乳酸菌能顯著提高水產(chǎn)動物的消化吸收功能，同時產(chǎn)生的肽聚糖增加了水產(chǎn)動物對病原體的免疫能力；產(chǎn)品中高濃度的酵母菌能提高魚體生長需要的豐富的單細胞蛋白，同時，酵母細胞被充分破壁，釋放出大量的β－1，3葡聚糖，顯著提高對革蘭氏陽性和陰性菌的免疫能力，采用糧食作物和常用飼料載體作為主要培養(yǎng)基原料，降低了生產(chǎn)成本，同時使用常用的發(fā)酵及生產(chǎn)設(shè)備，易于在水產(chǎn)養(yǎng)殖中推廣。 來源：百度馬 克 數(shù)據(jù)網(wǎng) 【專利類型】發(fā)明申請 【申請人】上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司 【申請人類型】企業(yè) 【申請人地址】201612上海市閔行區(qū)廟三路19號 【申請人地區(qū)】中國 【申請人城市】上海市 【申請人區(qū)縣】閔行區(qū) 【申請?zhí)枴緾N200610027552.7 【申請日】2006-06-11 【申請年份】2006 【公開公告號】CN101085982A 【公開公告日】2007-12-12 【公開公告年份】2007 【IPC分類號】C12N1/20; C12N1/16; C12P19/04; C12P1/04; C12P1/02; C12Q1/25; C12P19/00 【發(fā)明人】江瀚 【主權(quán)項內(nèi)容】1.一種利用乳酸桿菌和酵母菌生產(chǎn)微生物多糖制劑的制備方法，其特征在于， 采用液體高速培養(yǎng)和固體擴大結(jié)合的發(fā)酵方法，其生產(chǎn)步驟為： 第一步：發(fā)酵菌株選育 a.菌株篩選：以健康的鯽魚腸道中分泌物為菌源，采用MRS乳酸菌培養(yǎng)基 進行乳酸菌分離，篩選出一種植物乳桿菌，在啤酒發(fā)酵液中用酵母選擇 培養(yǎng)基分離釀酒酵母菌；將分離的兩種菌種分別放在酵母膏麥芽汁瓊脂 培養(yǎng)基中，在4-6℃溫度下保存菌種； b.將分離的植物乳桿菌和釀酒酵母菌分別接種于肉湯培養(yǎng)基中，在35-40 ℃溫度下培養(yǎng)20-25小時，然后將釀酒酵母菌接種于酵母膏麥芽汁瓊 脂培養(yǎng)基，將植物乳桿菌接種于乳酸菌培養(yǎng)基中，進行劃線培養(yǎng)，選出 生長快、菌體特征明顯的植物乳桿菌、釀酒酵母菌分別在實驗室中保存； c.生產(chǎn)制種：最后將選出生長快的植物乳桿菌轉(zhuǎn)接入裝有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 的茄子瓶中，將釀酒酵母菌轉(zhuǎn)接入酵母膏麥芽汁瓊脂作培養(yǎng)基的茄子瓶 中，在35-40℃溫度下培養(yǎng)45-50小時，待茄子瓶表面菌苔布滿，并 白中帶黃時即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中進行保存； 第二步：有益菌株的液體培養(yǎng) a.按以下重量配比例稱取各菌種：植物乳桿菌55-65％、釀酒酵母菌35 -45％； b.將稱取的植物乳桿菌和釀酒酵母菌混合在一起進行復合培養(yǎng)：步驟a中稱 取的混合菌苔按1∶25-30的比例接種于120-130℃高溫滅菌的液體培 養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中攪拌30min，其轉(zhuǎn)速為200-240r/min，攪拌均勻后 放入消毒后塑料桶中靜置5-7天，靜置過程中每天測定Ph值并釋放產(chǎn)出 的氣體； c.發(fā)酵過程中抽樣3次，顯微鏡下檢測菌體生長情況和測定Ph值，當活菌 總數(shù)達到20億/ml濃度和Ph值達到3.0-4.0時停止發(fā)酵； 第三步：離心收集菌體細胞壁 a.將步驟1中發(fā)酵液在離心機以每1kg8000r/min，10min離心收集菌體沉 淀，用0.9％生理鹽水反復洗滌細菌至白色，將菌體懸浮于蒸餾水中，然 后用超聲波細胞破碎機處理30-40min，進行物理破碎2-4次； b.細胞壁分離：將物理破碎后的溶液在離心機以每1kg4000r/min離心15- 20min，移去沉淀物，以去除未破碎菌體，再將上清夜在離心機以每 1kg8000r/min離心20min，收集沉淀的粗細胞壁； 第四步：菌群的固體擴大培養(yǎng) a.將步驟2復合培養(yǎng)的菌液混合按1∶25-30的比例接入120-130℃、30 -45min高溫滅菌的固體擴大培養(yǎng)基中，攪拌30-45min至均勻，到入 50-70kg消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度30-35℃時間8-10天，發(fā) 酵過程中取樣三次，測定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測定水分為 35-40％、Ph值為3.5-4.0； b.添加粗細胞壁：將細胞壁收集物與固體擴大發(fā)酵物按1∶50-60比例混 合，倒在攪拌機中攪拌，轉(zhuǎn)速為150-200轉(zhuǎn)/min，攪拌時間為30min； 第五步：粉碎添加特殊載體 a.干燥：將步驟4發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時間先后放入培養(yǎng)箱干燥，溫度控制 在40-45度，時間14-16小時，干燥完成的物料水份控制在≤12％； b.添加載體；將干燥后的產(chǎn)品按1∶0.02-0.03的比例添加載體，倒入攪 拌機中攪拌均勻，然后轉(zhuǎn)入粉碎機進行粉碎，物料溫度控制在45℃以 下，粉碎后的物料過50目篩網(wǎng)，篩后粗料重新粉碎； c.過篩后裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標識牌，轉(zhuǎn)入成品庫 有序堆放；取樣檢測，主要參數(shù)：水份≤12％、活菌數(shù)60-80億/g；物 理性狀：深黃色粉末狀固體。 【當前權(quán)利人】上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司 【當前專利權(quán)人地址】上海市閔行區(qū)廟三路19號 【專利權(quán)人類型】有限責任公司(自然人投資或控股) 【統(tǒng)一社會信用代碼】91310112703128457W 【被引證次數(shù)】15 【被他引次數(shù)】15.0 【家族被引證次數(shù)】15

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